2. Anfärben & rechtzeitig zählen

Gib einen Tropfen Methylenblau zur verdünnten Probe und warte ein paar Minuten. Lebende Zellen reduzieren den Farbstoff zu einer farblosen Form und bleiben klar. Toten Zellen fehlt diese Fähigkeit, sie färben sich blau.

Die Uhr beginnt zu laufen, sobald der Tropfen fällt. Du solltest innerhalb von fünf Minuten am Mikroskop sitzen — lad die Kammer also sofort, denn ein Teil der Zeit geht dafür drauf, dass sich die Zellen dort erst absetzen müssen.

Steht die Probe deutlich länger, färben sich irgendwann auch lebende Zellen, und die Hefe sieht schlechter aus, als sie ist.

Vertrau der Zahl mit Vorsicht. Methylenblau überschätzt die Viabilität — den Anteil lebender Zellen — am stärksten, wenn sie eigentlich niedrig ist. Bei gesunder Hefe — etwa 90 % und darüber — funktioniert es gut. Erhältst du einen deutlich niedrigeren Wert, lies ihn als mit dieser Hefe stimmt etwas nicht, nicht als exakte Zahl.

3. Die Kammer laden

Die Zählkammer ist ein dicker Objektträger mit eingraviertem Gitter. Leg das Deckglas darüber und drück es fest, bis du Newtonsche Ringe siehst — schwache regenbogenfarbene Streifen dort, wo die beiden Gläser sich berühren.

Die Ringe sind die ganze Messung. Sie beweisen, dass das Deckglas exakt 0,1 mm über dem Gitter liegt, und diese Tiefe macht die Kammer erst zu einem Messinstrument. Liegt das Glas falsch, ist jede spätere Zahl falsch, egal wie sorgfältig du gezählt hast.

Berühr mit der Pipette den Rand des Deckglases — die Kapillarkraft saugt die Flüssigkeit von selbst ein. Nicht überfüllen. Läuft es in die Rinnen rund um das Gitter, stimmt die Tiefe nicht mehr: spülen, trocknen, noch einmal. Lass es dann ein paar Minuten stehen, damit sich die Zellen in einer Ebene absetzen.

Die Kammer sollte sauber sein, aber nicht steril. Angetrocknete Hefe vom letzten Mal wird zu Geisterzellen in der Zählung, und Schmutz unter dem Deckglas hebt es aus seiner Tiefe. Hygiene bedeutet hier Messfehler, nicht Kontamination.

4. Die fünf Quadrate

Such das zentrale Gitter bei 400-facher Vergrößerung. Es ist ein Quadratmillimeter, geteilt in 25 mittlere Quadrate. Du zählst nicht alle — die vier Ecken und die Mitte reichen.

Fünf Quadrate sind gewählt, weil es schnell geht, nicht weil fünf richtig wäre. Entscheidend für die Genauigkeit ist, wie viele Zellen du zusammenbekommst: etwa 100 Zellen ergeben ±10 %, 400 Zellen ergeben ±5 %. In der Praxis zielst du auf 10–40 Zellen pro Quadrat — fünf Quadrate mit je zwanzig sind die hundert, die du willst. Kommst du nur auf etwa vierzig insgesamt, zähl lieber mehr Quadrate, statt sich damit zufriedenzugeben, und verdünn beim nächsten Mal weniger.

Das Gitter gilt für eine Neubauer improved, den gängigen Typ. Hast du eine andere Kammer, sieht das Gitter anders aus, und dann gilt auch die Formel im letzten Schritt nicht.

5. Die Grenzfälle

Manche Zellen liegen genau auf einer Linie. Zählst du sie in beiden Quadraten, die sie berühren, bekommst du zu viele; überspringst du sie in beiden, bekommst du zu wenige.

Zwei der vier Seiten zählen, sodass jede Zelle in genau einem Quadrat landet. Welche zwei, spielt keine Rolle — nur, dass es durchgehend dieselben zwei sind.

Und Hefe sprosst. Eine Knospe zählt erst als eigene Zelle, wenn sie mindestens drei Viertel so groß wie die Mutterzelle geworden ist — ist sie kleiner, zählt sie mit der Mutterzelle. Auch hier ist die Konsequenz wichtiger als die Schwelle: Behalt jedes Mal dieselbe Regel bei, sonst lassen sich deine eigenen Messungen nicht miteinander vergleichen.

6. Ausrechnen

Zähl die klaren und die blauen Zellen getrennt — und addier sie dann. Die Summe ergibt die Dichte, die beiden Zahlen einzeln die Viabilität.

Alle Zellen, nicht nur die lebenden. Die Viabilität wird im nächsten Schritt abgezogen — ziehst du sie schon hier ab, wird sie zweimal abgezogen, und du pitchst zu viel.

Die Zahl 10.000 ist keine Magie. Das Gitter ist 1 mm² groß und das Deckglas liegt 0,1 mm darüber, also fasst der Kasten, in den du hinabblickst, 0,0001 mL. Von dort auf einen ganzen Milliliter zu kommen bedeutet, mit 10.000 zu multiplizieren. Die Kammer misst ihr eigenes Volumen — deshalb spielt es keine Rolle, wie genau du die Probe hineingetropft hast.

Jetzt hast du eine gemessene Zahl, die du in den Anstellrechner eingeben kannst, statt einer Vermutung, wie viele Milliarden im Glas sitzen. Modus „Gemessen“ öffnen →

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