La misma lección, con las figuras en movimiento.
Agar & tubos inclinados — Protocolo completo
La receta de mesa completa para hacer agar de extracto de malta y verter tanto placas de Petri como tubos inclinados (slants). Las cantidades vienen de un montaje casero probado y sirven como base fiable para adaptar a tu propio equipo.
Material
- Frasco de vidrio para medios, 250 ml (p. ej. DURAN, con marcas de volumen)
- Balanza de precisión (resolución 0,1 g)
- Olla a presión
- Embudo + filtros de café (usados dobles)
- Extracto de malta seco claro (DME / malta en polvo)
- Agar-agar en polvo
- Placas de Petri de vidrio
- Tubos de ensayo de vidrio con tapón
- Gradilla metálica para tubos
- Papel de aluminio
- Lámpara de alcohol / mechero
- Microondas (para volver a fundir el agar)
1. Cocer el medio (150 ml de agar de malta)
- Pesa 15 g de DME claro en el frasco y rellena con agua hasta la marca de 150 ml. (= 100 g/L — la misma densidad de mosto que un starter.)
- Cuece el frasco 15 min en la olla a presión para disolver y esterilizar el mosto.
- Enfría el frasco en un baño de agua fría.
- Filtra a través de doble filtro de café y vuelve a verter el líquido claro en el frasco. (Quita la turbidez proteica para que las placas cuajen claras.)
- Añade 3,6 g de agar-agar (≈ 2,4 %). Devuelve el frasco a la olla a presión.
- Cuece 20 min en la olla a presión hasta que el agar esté totalmente disuelto.
La olla a presión debe alcanzar la temperatura real de esterilización (~121 °C / 15 psi). Verifica con cinta de autoclave que cambia de color por completo — no te fíes solo del tiempo.
2. Esterilizar el material de vidrio
- Encaja las placas de Petri en la gradilla metálica y cuécelas ~15 min en la olla a presión (fuego bajo, ~5 dl de agua en la olla).
- Llena los tubos de ensayo con medio dejando al menos 1 cm hasta el borde (para que no rebose al inclinarlos ~20–35°). Enrosca los tapones flojos.
Los tapones solo deben ir flojos — un tubo cerrado acumula presión y el vidrio puede agrietarse en la olla.
3. Verter placas e inclinar tubos
- Vuelve a fundir el frasco de agar en el microondas si ha cuajado, girándolo con suavidad de vez en cuando.
- Deja enfriar el frasco hasta que puedas sostenerlo contra la mejilla sin quemarte (~50–55 °C). Más caliente te quema; más frío cuaja antes de que hayas vertido.
- Trabaja junto a una llama de alcohol (el aire estéril ascendente aleja el polvo). Vierte ~10 ml en cada placa de Petri. Déjalas cuajar con la tapa entreabierta hasta que desaparezca la condensación.
- Para los slants: tras cocer, aprieta los tapones e inclina los tubos a un ángulo de 20–35° hasta que el agar cuaje en superficie inclinada.
- Guarda las placas y los tubos terminados boca abajo en el frigorífico.
El agar rebosa muy fácilmente en el microondas — calienta en tandas cortas y vigila.
La superficie inclinada de un tubo inclinado da más área de crecimiento para sembrar en estría dentro del tubo estrecho.
Resiembra el tubo inclinado cada tres meses. La levadura sigue viviendo lentamente en el frigorífico y, más allá de ~3 meses, no se puede descartar la deriva genética. Anota la fecha en el tubo — y congela la cepa en glicerol si quieres conservarla durante años.