← Soul of Beer
Öppna protokollet i appen →

Samma lektion, med figurerna i rörelse.

Cellräkning med mikroskop (Neubauer-improved)

Räkna exakt hur många celler du har (celler/mL) och hur stor andel som lever (viabilitet %) — så du vet precis hur mycket jäst du ska pitcha. Använder en Neubauer-improved räknekammare och metylenblått. Fungerar för både en slurry och en färdig förkultur.

Material

  • Räknekammare Neubauer-improved (hemocytometer) + tillhörande täckglas
  • Mikroskop (100–400×)
  • Precisionspipett (mikropipett)
  • Provrörsställ med minst 3 provrör (för spädningsstegen)
  • Destillerat eller avkokt, avkylt vatten (spädvätska)
  • Metylenblått-lösning (0,01–0,1 %)
  • Handklickare (tally counter)
  • Luddfria dukar + ytdesinfektion
  • Jästprov (homogeniserad slurry eller förkultur)

Innan du börjar

  1. Rengör räknekammaren och täckglaset med en luddfri duk — inga fingeravtryck eller damm på rutnätet.
  2. Homogenisera jästprovet noga (snurra/skaka) så cellerna är jämnt fördelade — annars blir räkningen fel.
Aseptik är inte kritiskt här (du ska inte odla provet), men rena redskap och rör ger en renare räkning.

Steg 1 — Späd provet

  1. Späd i rena provrör från provrörsstället. Tjock slurry: 1:100 (1 del prov + 99 delar vatten). Tunn förkultur: kanske 1:10.
  2. Sikta på att den centrala stora rutan ska innehålla ~100–200 celler (~4–8 per mellanruta) — för tätt går inte att räkna, för glest blir statistiskt osäkert.
  3. Notera din spädningsfaktor (t.ex. 1:100 → faktor 100). Du behöver den i uträkningen.
Pipettera exakt — spädningen är den största felkällan i hela metoden.

Steg 2 — Färga (viabilitet)

  1. Tillsätt en droppe metylenblått till det spädda provet och blanda försiktigt. Vänta 1–2 min.
  2. Levande celler stöter ut färgen och ser klara ut; döda celler tar upp färgen och blir blå.
  3. Viabilitet vs vitalitet — läs mer →
Vänta inte för länge — efter ett tag börjar även levande celler ta upp färg och viabiliteten underskattas.

Steg 3 — Ladda kammaren

  1. Lägg täckglaset över rutnätet. Rör pipettspetsen mot täckglasets kant och låt kapillärkraften suga in ~10 µL. Fyll inte över — vätska i kanalerna men inte översvämmat.
  2. Låt stå ~3 min så cellerna lägger sig i fokusplanet.

Steg 4 — Räkna

  1. Fokusera på den centrala stora rutan (1 mm², 25 mellanrutor) vid 100–400×.
  2. Gränsregel: räkna celler som nuddar rutans övre och vänstra linje (grön ✓), men INTE de som nuddar nedre och högra (röd ✗) — så du inte dubbelräknar. ✓✓✗✗ ✓✗
  3. Knoppar: en knopp räknas som en egen cell om den är minst tre fjärdedelar av modercellens storlek, annars som en cell.
  4. Klicka levande (klara) och döda (blå) var för sig. Sikta på ≥100 celler totalt för god statistik.

Steg 5 — Räkna ut

  1. Celler/mL = celler i centrala stora rutan × 10 000 × spädningsfaktor. (Ex: 120 celler vid 1:100 → 120 × 10 000 × 100 = 1,2 × 10⁸ = 120 miljoner celler/mL.)
  2. Viabilitet % = levande / (levande + döda) × 100.
  3. Totalt antal celler = celler/mL × provets volym (mL).
  4. Räknade du bara en delmängd av de 25 mellanrutorna? Skala: celler/mL = (celler / antal räknade mellanrutor) × 25 × 10 000 × spädning.
  5. Låt Pitchkalkylatorn räkna åt dig → under Uppmätt (räknekammare) — fyll i levande, döda, antal rutor och spädning, så fylls celler/mL och viabilitet i automatiskt. Den gör steg 6 också — jämför mot ditt mål och säger hur många mL du ska pitcha.

Steg 6 — Jämför mot din pitch

  1. Slå upp ditt target-cellantal i Pitch Calculator (batchvolym × OG × pitch rate) och jämför med ditt totala antal.
  2. Räkna med viabiliteten — pitcha efter levande celler (totalceller × viabilitet %).
Metylenblått överskattar viabiliteten, mest när den är låg – under ungefär 90 % (klassisk hemma-metod). Metylenviolett är noggrannare men svårare att få tag på.
Kökslabbet