La même leçon, avec les figures en mouvement.
Boîtes & géloses inclinées — Protocole complet
La recette de paillasse complète pour fabriquer de la gélose au moût de malt et couler à la fois des boîtes de Petri et des géloses inclinées (slants). Les quantités viennent d'un montage maison testé et servent de point de départ éprouvé à adapter à ton propre matériel.
Matériel
- Flacon en verre pour milieux, 250 ml (p. ex. DURAN, avec repères de volume)
- Balance de précision (résolution 0,1 g)
- Autocuiseur
- Entonnoir + filtres à café (utilisés en double)
- Extrait de malt sec clair (DME / malt en poudre)
- Poudre d'agar-agar
- Boîtes de Petri en verre
- Tubes à essai en verre avec bouchon
- Portoir à tubes en métal
- Papier aluminium
- Lampe à alcool / bec
- Micro-ondes (pour refondre la gélose)
1. Cuire le milieu (150 ml de gélose de malt)
- Pèse 15 g de DME clair dans le flacon et complète avec de l'eau jusqu'au repère 150 ml. (= 100 g/L — la même densité de moût qu'un pied de cuve.)
- Passe le flacon 15 min à l'autocuiseur pour dissoudre et stériliser le moût.
- Refroidis le flacon dans un bain d'eau froide.
- Filtre à travers un double filtre à café et reverse le liquide clair dans le flacon. (Enlève le trouble protéique pour que les boîtes prennent claires.)
- Ajoute 3,6 g d'agar-agar (≈ 2,4 %). Remets le flacon dans l'autocuiseur.
- Passe 20 min à l'autocuiseur jusqu'à ce que la gélose soit entièrement dissoute.
L'autocuiseur doit atteindre la vraie température de stérilisation (~121 °C / 15 psi). Vérifie avec du ruban d'autoclavage qu'il change complètement de couleur — ne te fie pas qu'au temps.
2. Stériliser la verrerie
- Cale les boîtes de Petri dans le portoir métallique et passe-les ~15 min à l'autocuiseur (feu doux, ~5 dl d'eau dans la cuve).
- Remplis les tubes à essai de milieu en laissant au moins 1 cm jusqu'au bord (pour que rien ne déborde une fois inclinés ~20–35°). Visse les bouchons sans serrer.
Les bouchons doivent être juste posés sans serrer — un tube fermé monte en pression et le verre peut se fissurer dans la cuve.
3. Couler les boîtes et incliner les tubes
- Refonds le flacon de gélose au micro-ondes s'il a pris, en le faisant tourner doucement de temps en temps.
- Laisse le flacon refroidir jusqu'à pouvoir le tenir contre ta joue sans te brûler (~50–55 °C). Plus chaud te brûle ; plus froid prend avant que tu aies coulé.
- Travaille à côté d'une flamme à alcool (l'air stérile ascendant éloigne la poussière). Verse ~10 ml dans chaque boîte de Petri. Laisse-les prendre couvercle entrouvert jusqu'à ce que la condensation disparaisse.
- Pour les géloses inclinées : après cuisson, serre les bouchons et couche les tubes à un angle de 20–35° jusqu'à ce que la gélose prenne en surface inclinée.
- Conserve les boîtes et les tubes finis à l'envers au frigo.
La gélose déborde très facilement au micro-ondes — chauffe par courtes rafales et surveille.
La pente d'une gélose inclinée offre plus de surface de croissance pour strier dans le tube étroit.
Réensemence la gélose inclinée tous les trois mois. La levure continue de vivre lentement au frigo et, au-delà de ~3 mois, on ne peut pas exclure une dérive génétique. Note la date sur le tube — et congèle la souche dans du glycérol si tu veux la garder des années.