La misma lección, con las figuras en movimiento.
Recuento celular con microscopio (Neubauer-improved)
Cuenta exactamente cuántas células tienes (células/mL) y cuántas están vivas (viabilidad %) — para saber con precisión cuánta levadura sembrar. Usa una cámara de recuento Neubauer-improved y azul de metileno. Funciona tanto para un sedimento como para un starter terminado.
Material
- Cámara de recuento Neubauer-improved (hemocitómetro) + su cubreobjetos
- Microscopio (100–400×)
- Pipeta de precisión (micropipeta)
- Gradilla con al menos 3 tubos (para los pasos de dilución)
- Agua destilada o hervida y enfriada (diluyente)
- Solución de azul de metileno (0,01–0,1 %)
- Contador manual
- Paños sin pelusa + desinfectante
- Muestra de levadura (sedimento o starter homogeneizado)
Antes de empezar
- Limpia la cámara de recuento y el cubreobjetos con un paño sin pelusa — sin huellas ni polvo en la cuadrícula.
- Homogeneiza bien la muestra (gira/agita) para que las células estén repartidas de manera uniforme — si no, el recuento sale mal.
La asepsia no es crítica aquí (no vas a cultivar la muestra), pero unas herramientas y tubos limpios dan un recuento más limpio.
Paso 1 — Diluir la muestra
- Diluye en tubos limpios de la gradilla. Sedimento espeso: 1:100 (1 parte de muestra + 99 partes de agua). Starter fino: quizá 1:10.
- Apunta a que el cuadrado grande central contenga ~100–200 células (~4–8 por cuadrado mediano) — demasiado denso es ilegible, demasiado disperso es estadísticamente frágil.
- Anota tu factor de dilución (p. ej. 1:100 → factor 100). Lo necesitas para el cálculo.
Pipetea con precisión — la dilución es la mayor fuente de error de todo el método.
Paso 2 — Teñir (viabilidad)
- Añade una gota de azul de metileno a la muestra diluida y mezcla con suavidad. Espera 1–2 min.
- Las células vivas expulsan el colorante y quedan claras; las muertas lo captan y se vuelven azules.
- Viabilidad vs vitalidad — leer más →
No esperes demasiado — al cabo de un rato incluso las células vivas captan el colorante y la viabilidad se subestima.
Paso 3 — Cargar la cámara
- Coloca el cubreobjetos sobre la cuadrícula. Toca el borde del cubreobjetos con la punta de la pipeta y deja que la capilaridad absorba ~10 µL. No llenes de más — líquido en los canales, no inundado.
- Déjalo reposar ~3 min para que las células se asienten en el plano de enfoque.
Paso 4 — Contar
- Enfoca el cuadrado grande central (1 mm², 25 cuadrados medianos) a 100–400×.
- Regla de borde: cuenta las células que tocan las líneas superior e izquierda del cuadrado (verde ✓), pero NO las que tocan la inferior y la derecha (rojo ✗) — para no contar dos veces.
- Yemas: una yema cuenta como célula aparte si mide al menos tres cuartos de la célula madre, si no como una célula.
- Marca vivas (claras) y muertas (azules) por separado. Apunta a ≥100 células en total para buena estadística.
Paso 5 — Calcular
- Células/mL = células en el cuadrado grande central × 10 000 × factor de dilución. (Ej.: 120 células a 1:100 → 120 × 10 000 × 100 = 1,2 × 10⁸ = 120 millones de células/mL.)
- Viabilidad % = vivas / (vivas + muertas) × 100.
- Células totales = células/mL × volumen de la muestra (mL).
- ¿Contaste solo una parte de los 25 cuadrados medianos? Escala: células/mL = (células / cuadrados medianos contados) × 25 × 10 000 × dilución.
- Deja que la calculadora lo haga → en Medido (Hemocitómetro) — introduce vivas, muertas, cuadros contados y dilución, y células/mL y viabilidad se rellenan solas. También hace el paso 6 — compara con tu objetivo y te dice cuántos mL sembrar.
Paso 6 — Comparar con tu siembra
- Busca tu número de células objetivo en la calculadora de siembra (volumen × OG × tasa de siembra) y compara con tu total.
- Ten en cuenta la viabilidad — siembra según las células vivas (total × viabilidad %).
El azul de metileno sobreestima la viabilidad, sobre todo cuando es baja – por debajo de un 90 % (método casero clásico). El violeta de metileno es más preciso pero más difícil de conseguir.